AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E ANTI-INFLAMATÓRIA DO EXTRATO HIDROALCOÓLICO DA SEMENTE DE ABÓBORA (Cucurbita maxima) E DA CUCURBITACINA E (CuE) EM NEUTRÓFILOS HUMANOS EXPOSTOS À FUMAÇA DO CIGARRO
neutrófilos, fumaça de cigarro, mieloperoxidase.
A exposição à fumaça do cigarro está associada à indução de estresse oxidativo e inflamação, contribuindo para o desenvolvimento e a progressão de doenças respiratórias. Os neutrófilos desempenham papel central nesse processo, uma vez que produzem espécies reativas de oxigênio (ROS) e liberam armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs), mecanismos importantes para a defesa do hospedeiro, porém potencialmente deletérios quando desregulados. Nesse contexto, a investigação de compostos naturais com possível atividade antioxidante e imunomoduladora torna-se relevante. Cucurbita maximai, além de seu uso alimentar, apresenta sementes ricas em metabólitos bioativos, incluindo triterpenos como a cucurbitacina E, descritos na literatura por suas propriedades biológicas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade celular, a produção de ROS e a formação de NETs em neutrófilos humanos expostos ao extrato da fumaça do cigarro (CSE), bem como investigar o potencial antioxidante e anti-inflamatório do extrato hidroalcoólico das sementes de C. maxima (ESA) e da cucurbitacina E (CuE). Neutrófilos humanos isolados de indivíduos saudáveis não fumantes foram submetidos a ensaios de citotoxicidade por citometria de fluxo, utilizando Anexina-V e Iodeto de Propídeo, produção de ROS, utilizando a sonda 2’,7’-diclorodihidrofluoresceína diacetato (DCFDA), e quantificação de NETs foi mensurada por meio do PicoGreen. Os grupos experimentais incluíram Controle Negativo (CN), Controle Positivo (CP), CSE (3, 5 e 10%), ESA e CuE. Os resultados demonstraram que o CSE nas concentrações de 3% e 5% mantiveram viabilidade celular superior a 90%, enquanto a concentração de 10% induziu elevada citotoxicidade. O ESA apresentou viabilidade celular acima de 90% em todas as concentrações avaliadas (0,01; 0,1 e 1 mg/mL). Na avaliação da produção de ROS, CSE 3% e 5% não induziram níveis detectáveis de ROS. O ESA, nas concentrações de 0,5 mg/mL e 1 mg/mL, foi capaz de inibir a produção de ROS em neutrófilos estimulados com PMA (p < 0,05), apresentando valor de IC₅₀ de 0,172 ± 0,120 mg/mL. Em contraste, a CuE não apresentou efeito antioxidante significativo nas concentrações testadas (1, 3 e 30 µM). Na análise da formação de NETs, CSE 3% e 5% induziram a liberação de NETs. Na avaliação da atividade anti-inflamatória, os tratamentos com ESA e CuE não reduziram significativamente a liberação de DNA extracelular. Conclui-se que CSE é capaz de induzir a liberação de NETs, mas não de ROS. O extrato hidroalcoólico das sementes de Cucurbita maxima apresenta potencial antioxidante em neutrófilos humanos, sem induzir citotoxicidade, embora não module a formação de NETs induzidas pela fumaça do cigarro. A cucurbitacina E, por sua vez, não demonstrou atividade antioxidante nem efeito anti-inflamatório sobre a formação de NETs, sugerindo que seus efeitos biológicos são dependentes do contexto celular e do mecanismo avaliado.